C57BL/6小鼠是使用最廣泛的（de）近交係小鼠，被應用於免疫學、神經生物學、腫瘤學等生命科學研究，同時也（yě）是基因工程小（xiǎo）鼠的最主要背景品係。在免疫學研究中，從C57BL/6小鼠脾髒中獲取免疫細胞是一種常規（guī）操作。

請想象以（yǐ）下場景：正在取小鼠脾髒的學（xué）生發現脾髒出現了黑色斑點（圖1），“老師（shī），大（dà）事不好，我們的小鼠怕是被感染了。你看，小鼠的脾（pí）髒壞死了（le），一（yī）端已經變黑了（le）。”估計（jì）很多（duō）動物設施管理者都會被（bèi）驚出一身冷汗。

筆（bǐ）者查閱（yuè）了相關文獻（xiàn）並做了初步（bù）實驗，確定該現（xiàn）象是非（fēi）白化小鼠（shǔ）自身的色素在脾髒沉積的自然現象且與毛發生長周期性（xìng）有關（guān），對基礎免疫學（xué）實驗沒有影（yǐng）響。

01、PART

C57BL/6小鼠脾（pí）髒出現黑色斑點的現（xiàn）象（xiàng），首次報道要追溯到1967年（nián），Weissman等人在上（shàng）免疫學實驗課時發（fā）現C57BL/Ka和C57BL/6小鼠的一些脾髒上有黑色的斑點（diǎn）。C57BL/Ka×Balb/c F1代小鼠的脾髒（zāng）上也發現了黑色斑點，但是（shì）Balb/c小鼠（白化小鼠（shǔ））脾髒無黑色斑點。初步研究發現該現象沒有明顯的孟德爾遺傳規律。隨後的實驗發現脾髒中的黑色斑點不能被普魯氏藍染（rǎn）色，排除了含鐵的色素。

另外可以用DOPA氧化酶染色，可以被過氧化氫漂白，說明脾髒黑色斑點中含有真黑色素（melanin）[1]。該現象加幾個實驗組成的文章發表在Nature（發頂刊這麽容易嗎？有沒有被驚到）。文中Weissman等人討論了這（zhè）些黑色素細胞可能是從（cóng）其它組織遷移而（ér）來。

02、PART

1977年，Auriol C等人在對C57BL/10接種支原體的實驗中也發（fā）現（xiàn）了這種現象，並排除了（le）支（zhī）原（yuán）體感染的影響（xiǎng）[2]。1989年，Veninga, T.S等人動（dòng）用了電鏡等（děng）多種觀察（chá）手段，發現是脾髒紅髓中的巨噬細胞吞噬了（le）色素顆粒[5]（圖2）。

1995年，van der Heijden等人研究進一步認為脾髒（zāng）黑色斑點主（zhǔ）要是由真黑色素（melanin）造成的，脂褐質（lipofuscin）或血鐵（tiě）黃素（haemosiderin）不（bú）是造成（chéng）該現象的主要色素。

至此（cǐ），對小鼠脾髒黑（hēi）色斑點的研究（jiū）主（zhǔ）要集中在切（qiē）片鏡檢等光學形（xíng）態學觀察手（shǒu）段[4]。

03、PART

更深入的研究出現在（zài）2005年，從事色素研究的Przemyslaw M. Plonka等（děng）人首次使用電子順磁共振（zhèn）波譜（EPR）證明了C57BL/6脾髒黑（hēi）斑含有真黑色素（sù）（melanin）。並且還發現脾髒黑斑現象與毛發（fā）周期之間的相關性（xìng）（圖3），他們（men）發現在小鼠毛發周期的退化期，存在多達（dá）50-80%的黑色素沉著脾髒，而在處於毛發周（zhōu）期深層（céng）休止期的小鼠中，黑色素變性（xìng）脾髒的百分比約為15%。EPR觀察到的脾髒真黑色素與皮膚中發現的色素（毛囊黑色素細胞和發幹）不同。與皮膚色素相比，其功率飽和度和線寬揭示了順磁性中心的異質性，這表明色素存在部分降解[6]。

04、PART

2009年Przemyslaw M. Plonka已經成（chéng）為通訊作者，他們實驗室延續了（le）前麵的研究，發現與年輕C57BL/6小鼠相比，老年C57BL/6小鼠沒有表現出肉眼可見的脾髒黑斑。認為小鼠的脾髒黑色素沉（chén）著現象一定程度上與毛發周期同步（bù）的皮膚黑色素沉著有關，並且脾髒黑色素（sù）在小鼠一（yī）生中逐（zhú）漸降解。因此（cǐ）小鼠脾髒黑色素沉著可能是一種研究體內衰老和黑色（sè）素降解機製的獨特現象[7]。

2015年Przemyslaw M. Plonka實驗室繼續發現脾髒黑（hēi）色斑點也出現在129/SvJ野鼠色（sè）（agouti）小鼠上（shàng）（圖4）。由於野鼠色（sè）agouti（agouti）表型是小型野生哺乳動物（wù）（如齧齒動物）的基本表型，對它們（men）來說是一種偽裝色。這說明與毛發色素沉著相關的脾髒黑色斑點現象並不是一（yī）種（zhǒng）僅（jǐn）在實（shí）驗室近交係小鼠（shǔ）中觀察到的奇異現象。這（zhè）一現（xiàn）象也可能出現（xiàn）在野外動物上[3]。

有關（guān）小鼠毛色更（gèng）詳盡深（shēn）入的內容（róng）可參閱本公眾號前文《小鼠的毛色是如何形成的？》及《小鼠毛（máo）色變化的分（fèn）子成因》。

筆者實驗室經常做小鼠胚胎移植實驗，需要用到大量C57BL/6（黑色）小鼠和ICR（白化）小鼠。經過一段（duàn）時間的觀察，發現（xiàn）不同批次C57BL/6小鼠脾髒黑斑出（chū）現的平均概率在15%左右，無明顯遺傳規律。ICR小鼠脾髒無黑斑現象。

筆者通過HE染（rǎn）色切片，發現與正常脾髒相比，黑斑脾髒的紅髓、白髓、生發中心等結構完整，數量正常，無炎症和壞死（sǐ）現象（圖5）。黑斑脾髒中紅髓部分散落著明（míng）顯的黑色細胞。六胺銀染色結果顯示黑色斑塊（kuài）形狀、大小（xiǎo）完全不（bú）一致，可以排（pái）除微生物感染（rǎn）（圖5），與Veninga, T.S等人的實驗結果類似[5]。

筆者（zhě）還檢測了黑斑脾髒的C57BL/6小鼠的血常規數據，並使用流（liú）式（shì）細胞術檢測CD4+和（hé）CD8+陽性T細胞的比例，發現與無（wú）黑斑（bān）脾（pí）髒小（xiǎo）鼠相比無顯著差（chà）別（結果不顯示（shì））。

小鼠脾（pí）髒黑色斑點這種現象貌似沒有太大用處，目前可（kě）以確定小鼠基礎生理（lǐ）指標和一些基礎免疫學指標正常，對免疫（yì）學研究應沒有影響。但是否可以作為人類色素沉著症的模型需要進一步研究（jiū）考察。

參考文獻：

[1] Weissman, I., Genetic and histochemical studies on mouse spleen black spots. Nature, 1967. 215(5098): p. 315.

[2] Auriol C, Hill,., H. Georgis, and J. Breaden, Pigment in the spleen of C57BL/10ScSn and related mice. Experientia, 1977. 33(7): p. 954-5.

[3] Michalczyk-Wetula, D., J. Wieczorek, and P.M. Plonka, Splenic melanosis in agouti and black mice. Acta Biochimica Polonica, 2015. 62(3): p. 457-463.

[4] van der Heijden, A., et al., Spleen pigmentation in young C57BL mice is caused by accumulation of melanin. Lab Anim, 1995. 29(4): p. 459-63.

[5] Veninga, T.S., R.A. Wieringa, and H. Morse, Pigmented spleens in C57BL mice. Lab Anim, 1989. 23(1): p. 16-20.

[6] Plonka, P.M., et al., Splenic eumelanin differs from hair eumelanin in C57BL/6 mice. Acta Biochimica Polonica, 2005. 52(2): p. 433-441.

[7] Michalczyk, D., et al., Extradermal melanin transfer? Lack of macroscopic spleen melanization in old C57BL/6 mice with de-synchronized hair cycle. Acta Biochimica Polonica, 2009. 56(2): p. 343-353.