摘要

小鼠屍檢的主要目（mù）的是通過肉眼觀察確定基因工程小鼠或患病小鼠的解剖特征（zhēng），並描述導致發病率和死亡率的病變。為後續檢查采集的組織需要適當處理和保存，以防止變質。

因此，高效的常規操作對於促進組織學和確保高質量的樣本至關重要。此外，優化技術（shù）最大限度地減少了損壞樣（yàng）本的數據丟失，減少了使用的動物數量，並支持3Rs“reduction”原則。

在本文中，我們提供（gòng）了一種用於（yú）小鼠組（zǔ）織采集的優化方法，也包（bāo）括培訓技巧和注意（yì）事項。

前言

小鼠屍（shī）檢是一種以係統方（fāng）式進行的死後科學檢查，能夠（gòu）觀（guān）察（chá）大體解剖並采集組織，作為實驗終止研究或動物健康篩查的一部分。小鼠屍檢在技術上具有挑戰性，各組操作人員之間的技術差異可能影響數據的可比性。

因此，製（zhì）定一個（gè）標準（zhǔn）化的方（fāng）案和密切監測人員培訓非常（cháng）重（chóng）要，以保持（chí）操作一（yī）致性和采集（jí）的組織質量。簡單的術語表有助（zhù）於確保操作者之間的（de）描述的（de）一致性。

本文中的方法平均需要2個小時左（zuǒ）右就可以（yǐ）掌握，如果熟練操作，10分鍾左右就能夠（gòu）完成1隻（zhī）小鼠（shǔ）的解剖操作。在操作組織或化學試劑時，需要佩戴適宜的PPEs(防護眼鏡、手套、白大褂和口罩等)。

注（zhù）意：在解剖實驗（yàn）動物前，必須進行（háng）培訓以掌握解（jiě）剖（pōu）技巧。

解剖前準備

本文所描述的解剖操作是在兩隻16周齡的B6J小鼠（shǔ）（雌雄各1隻）上進（jìn）行的。其飼養（yǎng）條件為：IVC飼養，自由采食飼料和飲水（shuǐ），符合動物福利。

如果需要生化檢測以（yǐ）補充大（dà）體觀察，在解剖（pōu）前（qián）可（kě）進行終末采血(全身麻醉後（hòu）進行)。一（yī）旦采（cǎi）集了（le）所有必要的（de）樣本，必須對小鼠進行放血或使（shǐ）用其他安樂死方法。采血操作人員必須經過培訓。

采集後的組織置（zhì）於10%中性緩衝（chōng）福爾馬（mǎ）林溶液中(10% neutral buffered formalin下文簡稱：10% NBF)，除非（fēi）有其他（tā）要求。一些組織可以放置在無纖維吸墨紙上，以避免折疊，並（bìng）便於在包埋和顯微分析時定位。

提示:10% NBF需要（yào）預先準備好（hǎo），對大（dà）多數組織具有良好的固定效果，理想的固定液（yè）與組織的（de）比例至少為20:1。固定（dìng）液體積不足會（huì）導致固定效果不良。

小鼠解剖具（jù）體步驟

對小鼠實（shí）施安樂死。在確認小鼠死亡（wáng）後(即血（xuè）液循環停止)，在解剖前應用70%的酒精浸濕毛皮，以降低過敏原風險。

穿過腹側皮（pí）膚和腹肌，穿過胸腔的（de）尾（wěi）緣，在劍骨下方(圖1-A和1-B)，做一個腹部切口。

然後從兩側向恥骨方向切開腹部，然後穿（chuān）過尾腹，切除整個腹側皮膚。切下的腹（fù）部皮膚（fū）部分（fèn）平鋪在（zài）一張紙上(圖1-C)。

√提示：確保切除的（de）腹部皮膚部（bù）分足夠寬，並包含乳（rǔ）腺組織。

使用26G 3/8針頭和（hé）5ml注射器吸取10% NBF對腸道和胃部組織進（jìn）行灌（guàn）注（zhù）(圖1-D)，以（yǐ）減少自溶，因為小（xiǎo）鼠死亡後腸內迅速發（fā）生自溶。

√注意：灌注要適量，否則腸道過度膨脹可能導致破裂或過度拉伸。

然後（hòu）摘下胃腸道（dào）。輕輕按住胃（wèi），剪斷食道，剝離腸（cháng）道。剪斷骨盆附近的結腸，盡可能（néng）完整的取下（xià）整個胃腸道。

√提示：抬高小鼠軀（qū）體可以使胃腸（cháng）道遠離腹腔，減少剪斷結腸時損傷其（qí）他組織的風（fēng）險。

圖1 (A-S)小鼠屍檢

（am:腹肌（jī）；d:膈肌；di:二腹（fù）肌；i:腸道；l:肝髒；m:咬肌；o:食（shí）管；q:股（gǔ）四頭肌（jī）；s:皮膚；sc:脊髓；sg:唾液腺；sn:坐骨神經；t:舌頭）

小心剪開肋弓到下頜骨的皮膚（fū），以減少對唾液腺和氣管造（zào）成損傷(圖（tú）1-E)。下頜骨唾液腺附（fù）著在皮膚（fū）上(圖1-F)。

接（jiē）下來（lái），從靠（kào）近前肢的兩側切開胸骨和肋骨，並穿過兩側鎖骨(圖1-G)。

√提示：剪（jiǎn）刀的一個刀片應該插入胸（xiōng）骨上切口，另一個（gè）刀片（piàn）插入肋骨和鎖骨外側，避免損傷胸腺（xiàn）或心髒。注意:避免損傷胸骨，因為胸骨可用（yòng）於（yú）評估骨髓。

使用26G3/8針（zhēn）頭通過氣管緩慢（màn）向肺部灌注NBF(圖1-H)。

√注意：避免多次穿孔氣管（guǎn），因為這會損傷組織。提示:為了有效進行（háng）肺部灌注，可以將針頭彎曲成90度或保定小鼠頭部，以形成（chéng）合（hé）適的針（zhēn）頭插入角度（dù）。

依次（cì）取下舌頭、下頜骨（gǔ）、甲狀腺（xiàn）、氣管、食道、心髒、胸腺和肺。切斷二（èr）腹肌和咬肌之間的下頜骨，並輕輕摘取組織器官(圖（tú）1-I和1-J)。

一並取下肝髒和膈肌（jī）(圖（tú）1-K)，操（cāo）作肝髒時要（yào）輕柔，因為肝髒易（yì）碎。

通過提拉輸尿管並切斷（duàn）背側連接，取下雙腎及（jí）其相伴的（de）腎上腺(圖1-L)。

如果是雄性動物，取下兩個睾丸並放入Hartmann’s固定液中。解剖兩個附睾並平放在紙上。將（jiāng）精囊、前列腺和膀胱整體切除，平放於紙上(圖2-A至2-D)。

√提示：對於眼睛（jīng）和睾丸（wán）等組織，使用Hartmann’s固定液(改良戴維（wéi）森)(Cat. H0290-500ML; Merck Life Science)可減少組織收縮和確保足夠的固定（dìng）。

樣品應在室溫下固定24-72小時（shí），然後轉移到（dào）10% NBF中。

如果是（shì）雌性動物，應切開恥骨，從卵巢到陰道（dào）口處，整個切除雌性生殖道，(圖2-E至（zhì）2-H)。一並取下膀胱，但不包括結腸，然後放置在紙上。

圖2  生殖道解剖，雄鼠(A-D)，雌鼠(E-H)。

（b:膀胱；c:結腸；e:附睾；o:卵巢；sv:精囊；t:睾丸；u:子宮角（jiǎo）。）

剝去顱骨處的皮膚，並在眶間切開顱骨(圖1-M)，以允（yǔn）許固定劑能夠滲透（tòu）進大腦。雙眼應連同視神經一起切除並放入（rù）Hartmann’s固定液中。

剝離從肩部到尾根（gēn）部的皮膚，去除皮下組織，鋪（pù）平放在紙上(圖1-N)。

從一側後肢沿股骨切取股四頭肌(圖1-O)。通過分割股二頭肌暴露坐（zuò）骨神經，取出（chū）並放在紙上(圖1-P)。

√注意：盡量減少對坐骨神經的操作，因為它很容易損（sǔn）傷。

髖關節處取下剩餘的後肢和（hé）後爪。這（zhè）個樣本包含膝關節，可以脫鈣進（jìn）行組織學檢查。

從寰枕間隙開始，切除兩側椎弓，並切除和收縮背（bèi）突，使脊髓暴露至腰（yāo）椎區域(圖1-Q和1-R)。胴體放置在10%的NBF中(圖1-S)，並固定至少24小（xiǎo）時。

√提示：脊髓暴露是操（cāo）作中最具技術挑戰（zhàn）性的部分。我們建議使用彎曲的和/或直（zhí）的彈簧剪刀和胴體定位(平放在解剖台上或彎曲在手上)，以（yǐ）減少對組織的張力。

總結

這種快（kuài）速完整的（de）小鼠屍檢方（fāng）法可以（yǐ）保存小鼠的所有組（zǔ）織，並最大限度地從單個標本中獲得數據。雖然必須考慮到物（wù）種之間的差異（yì），但這種方法很容易在大鼠、倉鼠、兔子等物種上複製。

不同的固定劑（jì）也可以（yǐ）用於滿足特定（dìng）的研（yán）究需要。組織可以保存在福爾馬林中，或者在最短的固（gù）定時間後，可以（yǐ）修剪、加工、石蠟包埋、切片並染色進（jìn）行組織學（xué）分析（xī）。

注意，任何骨樣本在（zài）包埋前都必須脫鈣，以使其更容易（yì）切割和避免破碎。

參考資（zī）料：

1.A guide to post-mortem examination procedure in mouse models，Alexandra Rodrigues1, Lynn Beresford1, Cheryl L Scudamore etc，Laboratory Animals 2022, Vol. 56(5) 466–470